Chất diệp lục là một sắc tố màu xanh lục được tìm thấy ở thực vật bậc cao và tất cả các sinh vật quang hợp khác. Chất diệp lục A và chất diệp lục B hòa tan trong etanol, ete và axeton và các dung môi khác, không hòa tan trong nước và ete dầu mỏ, do đó, có thể sử dụng các dung môi phân cực như axeton, metanol, etanol, etyl axetat, v.v. để chiết xuất chất diệp lục.
Quy trình chiết xuất diệp lục:
Chiết xuất diệp lục được chuẩn bị trong phòng nửa tối ở 25 độ C. Các bước chiết xuất như sau:
(1) Lấy 1000 gam lá tươi, giã nát cho vào bình Wechsler.
(2) Cho 1000 gam lá xanh đã được nghiền nát vào axeton có pha một ít canxi cacbonat (nhiệt độ 20 độ) để chiết, đến khi lọc và làm sạch các mảnh lá không màu.
(3) Cho dịch chiết axeton đã lọc vào phễu chứa 1 lít ete dầu hỏa và 100mL axeton, sau đó xoay nhẹ, đồng thời thêm nước cất cho đến khi phân tầng. Hầu hết axeton và các tạp chất hòa tan trong nước trong lớp nước bị loại bỏ, chỉ còn lại dung dịch ete dầu mỏ.
(4) Sau khi tinh chế lại dung dịch ete dầu mỏ bằng nước cất, dung dịch này được làm sạch hơn 5 lần bằng dung dịch metanol 2 0 0ml80% chứa ete dầu mỏ và 0,01g axit oxalic, và cuối cùng thu được huyền phù màu vàng lục. .
(5) Làm khô huyền phù bằng natri sunfat khan và tẩm vào cột làm bằng bột sacaroza dày 3 cm. Sau đó, làm sạch các sắc tố kết tủa để loại bỏ các carotenoid và làm cho chúng chỉ chứa chất diệp lục tự nhiên.
(6) Cột sacarozơ chứa diệp lục tự nhiên được chia thành hai lớp, lớp màu xanh lục có 4-10 mm diệp lục B, lớp màu xanh còn lại là lớp A 2-6 mm diệp lục.
(7) Phần nằm ở giữa lớp xanh lam (khoảng 1/2 lớp xanh lam) được cho vào ete, huyền phù được lọc và chiết, làm sạch bằng nước cất, làm khô bằng natri sunfat, lọc bằng dụng cụ để thu được diệp lục. MỘT.
(8) Loại bỏ phần giữa của lớp xanh ở (6), nhanh chóng cho vào ete để lọc và rửa để tạo dung dịch diệp lục B. ete.
Làm thế nào để tách trong quá trình chiết xuất?
Sắc ký là một phương pháp quan trọng để tách, tinh chế và xác định các hợp chất hữu cơ, đặc biệt trong phân tích vi mô được sử dụng rộng rãi. Sắc tố trong rau quả chủ yếu bao gồm caroten tan trong chất béo, lutein, chất diệp lục và anthocyanin tan trong nước. Trong các thí nghiệm chiết xuất, chúng ta có thể sử dụng nguyên tắc lọc anthocyanin hòa tan trong nước tương tự, từ đó có thể sử dụng sắc ký lớp mỏng, sắc ký cột, sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC) để tách beta-caroten, lutein. và chất diệp lục, bị suy yếu do sự phân cực của ba loại sắc tố lần lượt, có thể được chọn một cách thích hợp dung môi hữu cơ đơn hoặc tỷ lệ dung môi hỗn hợp khác nhau làm chất giãn nở và chất rửa giải, điều kiện tách tối ưu đã được xác định.
